इसकी कार्यप्रणाली सूक्ष्मजीवों के 30S राइबोसोमल सबयूनिट से जुड़कर प्रोटीन संश्लेषण को बाधित करना है जो इसके प्रति संवेदनशील होते हैं।
ऑक्सीटेट्रासाइक्लिन, इस प्रकार
यह राइबोसोम और अमीनोएसिल-टीआरएनए के बीच संबंध को बाधित करता है। ऐसा भी माना जाता है कि ऑक्सीटेट्रासाइक्लिन 50S राइबोसोम के साथ विपरीत रूप से जुड़ता है और संवेदनशील सूक्ष्मजीवों की साइटोप्लाज्मिक झिल्ली की पारगम्यता को बदल देता है। उच्च सांद्रता में ऑक्सीटेट्रासाइक्लिन कोशिकाओं में प्रोटीन संश्लेषण को भी बाधित कर सकता है।